细胞增殖作为生物体重要的生命特征，对于评价细胞活性、生理和病理状况至关重要。在细胞增殖检测过程中，常用的方法包括MTT、CCK-8和Edu检测法。针对这些常用方法，有一些关键的注意事项需要被遵守。
细胞增殖检测方法中的关键注意事项
MTT检测法注意事项
1. MTT的配制：在配制MTT时应注意无菌环境和避光操作，并注意避免直接接触皮肤以防致癌。此外，MTT应在4℃避光保存，并且在两周内使用完毕或者储存在-20℃下避免反复冻融。
2. 细胞接种密度的确定：选择适当的细胞接种密度非常重要，控制在103-104之间，以确保实验结果的准确性和可重复性。
3. 血清的影响：高浓度的血清会影响细胞的光吸收值，因此应该将使用的血清浓度控制在10%以下。
4. 设置凋零空和空白组：为了保证实验结果的准确性，必须设置凋零空和空白组。
5. 96孔板培养的注意事项：在使用96孔板进行培养时，合理分配96孔板的位置，四周的孔用PBS填充，以保持水分平衡。
6. 注意药物与MTT的反应：某些具有氧化还原性质的药物会与MTT发生反应，造成误差，应在加入MTT前用PBS清洗细胞。
7. 终止培养后的处理：在溶解结晶的过程中，要小心操作，避免影响吸光值，可以使用离心机或倾斜培养板的方法去除上清液。
CCK-8检测法注意事项
1. 细胞培养时间：根据不同细胞种类和数量确定细胞培养时间，观察染色程度来判断是否需要继续培养。
2. 中间孔湿度的控制：使用PBS填充边缘孔来保持培养板中间孔的湿度。
3. 添加CCK-8试剂：添加试剂时速度要快，避免药剂在墙头停留过久影响药物浓度，也可预先稀释CCK-8。
Edu检测法注意事项
1. 培养基量的控制：加入含有Edu的培养基时，要确保覆盖细胞且不过多。
2. 培养时间的确定：根据细胞种类和生长周期，确定合适的Edu培养时间，通常为2小时。
3. 细胞固定前的处理：使用PBS清洗未进入细胞DNA的Edu，注意清洗次数和清洗强度，避免细胞流失。
4. 染色后的处理：染色完成后最好立即进行观察，如条件限制，应在4℃避光保存，保存时间不超过3天。
通过遵守以上细胞增殖检测方法的注意事项，可以保证实验结果的准确性和可靠性，为细胞生物学、分子生物学等领域的研究提供有力支持。